ADN recombinante en la naturaleza y artificial en la Diabetes Mellitus

Ejemplo de ADN recombinante natural:

Son las llamadas: “Enzimas recombinasas” que catalizan las reacciones de recombinación natural. RecA, larecombinasa encontrada en Escherichia coli, es responsable de la reparación de las roturas en el ADN de doble hebra. En levaduras y otros organismos eucariotas hay dos recombinasas requeridas para reparar esas roturas. La proteína RAD51 es requerida para la recombinación mitótica y meiótica, y la proteína DMC1 es específica de la recombinación meiótica.

Ejemplo de ADN recombinante artificial:

En el caso de insulina humana, que es elaborada por bacterias en grandes recipientes de cultivos denominados bioreactores. Se aisla y se corta el gen productor de la insulina humana, para insertarlo en la bacteria Escherichia coli. Se potencia la multiplicación de las E. coli transgénicas de donde se extraía la insulina producida.

Bibliografía

1.- Garcia Garibay,T.L. Limusa Noriega (Biotecnología Alimentaria).(actualizado el 12 de Octubre del 2011) acceso el 30 de Mayo del 2017, disponible en:

https://books.google.com.ec/books?id=2ctdvBnTa18C&pg=PA25&lpg=PA25&dq=Recombinaci%C3%B3n+de+%C3%A1cidos+nucl%C3%A9icos+en+la+naturaleza&source=bl&ots=_qz55gzDEc&sig=X_fHzZS5x7g6FMrZud13KNtASS8&hl=es&sa=X&ei=0lZyVabaFYjdggSy44HIBw&ved=0CFEQ6AEwDA#v=onepage&q=Recombinaci%C3%B3n%20de%20%C3%A1cidos%20nucl%C3%A9icos%20en%20la%20naturaleza&f=false

Prueba Molecular para Diabetes Mellitus

Prueba de hibridación o de secuenciación en Diabetes Mellitus

La técnica de hibridacion empleada en Diabetes Mellitus es la tecnica de: Southern El método tipo Southern o Southern blot fue desarrollado para la detección de genes específicos en el ADN celular. El ADN es digerido con una enzima de restricción y los fragmentos son separados por tamaños mediante electroforesis en un gel. A continuación los fragmentos de ADN de doble cadena son desnaturalizados mediante un proceso químico separando las dos hebras componentes del ADN en sus cadenas sencillas. Posteriormente, el ADN inserto en el gel es transferido a un filtro de nitrocelulosa, con lo que en el filtro queda representada una réplica de la disposición de los fragmentos de ADN presentes en el gel. A continuación el filtro se incuba durante un tiempo con la sonda marcada (radiactivamente o con un fluorocromo); durante la incubación la sonda se va hibridando con las moléculas de ADN de cadena sencilla de secuencia complementaria (o muy parecida). La sonda unida al fragmento de ADN complementario se puede visualizar en el filtro de una forma sencilla mediante una exposición a una película de rayos X para el caso de sondas radiactivas o con una película sensible a la luz, para el caso de sondas con fluorocromo.

Proteinograma

A partir de un principio analítico general denominado ELISA, se trata de un procedimiento no contaminante y económicamente accesible que mediante la utilización de dos moléculas denominadas GAD e IA-2, en forma recombinante y en cantidades apropiadas.

En los  diabéticos, las células beta  son agredidas por células del sistema inmune, por esto se generan autoanticuerpos específicos para los componentes moleculares de las propias células beta. Estos autoanticuerpos, también denominados “marcadores”, comienzan a reproducirse mucho antes de que la enfermedad se manifieste. El método ELISA desarrollado trabaja mediante la detección de estos marcadores que se encuentran en la sangre, a través de dos autoantígenos recombinantes, algo alterados ex profeso respecto de las moléculas naturales, y que se denominan Trx-GAD e IA-2ic.

Bibliografía

1.- Ángeles Antón, M.W. Guía de Práctica Clínica sobre Diabetes Mellitus Tipo (Definición y criterios diagnósticos de la diabetes mellitus). (actualizado 25 de Enero DEL 2013) acceso el 27 de Mayo del 2017, disponible en:http://www.guiasalud.es/egpc/diabetes_tipo1/completa/apartado04/definicion.html

Prueba de PCR para la Diabetes Mellitus

Tema:  Variantes genotípicas del SNP -19 del gen de la CAPN 10 y su relación con la diabetes mellitus tipo 2 en una población de Ciudad Juárez, México.

Objetivo: Analizar la relación del polimorfismo SNP-19 del gen CAPN10 con el desarrollo de DM tipo 2 en población de Ciudad Juárezy contribuir a la identificación de posibles marcadores de susceptibilidad en población mexicana mestiza.

Tipo de muestra: Sangre en ayuno

Extracción.- ADN genómico de linfocitos

Lisis Separación  y Purificación: Según el método de Miller modificado, utilizando un kit de reactivos (Puregene Blood Kit de Gentra System).

Gen amplificador: CAPN 10

Tipo de PCR.-

Desnaturalización:  94 ºC por 30 segundos

Hibridación:  60 ºC por 30 segundos                                  35 ciclos

Extensión:  72 ºC por 30 segundos

Visualización: Electroforesis (EFO)

    

Bibliografía

1.- Vargas-Trujeque, M.C. División Académica Ciencias de la Salud (IMPLEMENTACIÓN DE UNA PCR-MULTIPLEX PARA LA IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LOS POLIMORFISMOS EN LOS GENES HNF1-a y HNF4-a).( actualizado el 05 de mayo del 2011) acceso el 20 de mayo del 2017, disponible en: http://www.archivos.ujat.mx/dip/Nueva%20carpeta/sem%20divul/2007/dacs.pdf

Prueba de tamizaje y prueba confirmatoria para Diabetes Mellitus

PRUEBA DE TAMIZAJE 

Examen de glucemia

               

Es un examen que mide la concentración de glucosa en la sangre, podemos tomar como referencia:

Para definir si el resultado es normal o no, se establecieron escalas o umbrales:

Por debajo de los 70 ml/dl: si el valor es inferior a 70, se dice que hay hipoglucemia, es decir, el nivel de glucosa en sangre está por debajo de lo normal.

Entre 70 y 110 ml/dl: si el resultado oscila entre estos dos umbrales, entonces la glicemia del paciente es normal.

Entre 110 y 126 ml/dl: este rango recibe el nombre de “glucosa alterada en ayuno”. Puede considerarse que el paciente está en un estado de prediabetes, y existe cierto riesgo de desarrollar diabetes tipo II.

Por encima de los 126 ml/dl: cuando el resultado indica 126 o más miligramos de glucosa en sangre, entonces el médico puede diagnosticar diabetes.(1)

PRUEBA CONFIRMATORIA

Hemoglobina glicosilada a1c

Es un examen de laboratorio que muestra el nivel promedio de azúcar (glucosa)

en la sangre durante los últimos tres meses. Este examen muestra qué tan bien

está controlando usted la diabetes. 

Procedimiento

Se necesita una muestra de sangre. Hay disponibilidad de dos métodos:

·                     Sangre que se extrae de una vena (venopunción). Esto se hace en un laboratorio.

·                     Punción en el dedo. Esto se puede hacer en el consultorio médico o le pueden

·                     recetar un equipo que usted puede usar en casa.

El médico puede ordenar este examen si usted tiene diabetes.

 El examen muestra qué tan bien está controlando usted su diabetes.

El examen también se puede emplear para detectar si hay diabetes.

Valores Normales

Los siguientes son los resultados cuando el HbA1c se usa para diagnosticar diabetes:

·                     Normal (no hay diabetes): menos de 5.7%

·                     Prediabetes: 5.7 a 6.4%

·                     Diabetes: 6.5% o más.

Bibliografía

1,Ávila Lachica, L. REVISTAANDA LUZA DE ATENCIÓN PRIMARIA(GUÍA DE RESPUESTAS EN DIABETES).(actualizado el 22 de Octubre de 2015) acceso el 14 de Mayo de 2017,disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/evidencia/eo-2010/eo101f.pdf

Alteraciones de la Epigenética de la Diabetes Mellitus

La epigenética se puede definir como el proceso de cambiar la función de un gen (probablemente transferible) sin ningún cambio en la secuencia de nucleótidos. Los efectos epigenéticos pueden ser alterados por el entorno y convertirse en mecanismos patógenos potencialmente importantes en enfermedades complejas y multifactoriales como la diabetes de tipo 2.
La DPP-4 es una peptidasa de 110 kDa asociada a la membrana de las células, fibroblastos y linfocitos epiteliales y endoteliales. Además de la función inmunológica, la DPP-4 se asocia con la sensibilidad a los agentes anticáncer en neoplasias malignas hematológicas. Los cambios epigenéticos asociados con la diabetes tipo 2 siguen siendo poco conocidos. Sin embargo, la epigenética juega un papel importante en el aumento de la incidencia de la diabetes tipo 2.(1)

La obesidad está asociada con el desarrollo de diabetes mellitus tipo 2 (DMT2), dislipidemia, cáncer, enfermedad cardiovascular y apnea obstructiva del sueño.3 Para los casos de obesidad y DMT2, los factores proinfl amatorios se encuentran intensifi cados. En este estado metabólico, llamado de glucolipotoxicidad, el exceso de ácidos grasos y glucosa ejerce varios efectos dañinos que conducen a una infl amación sistémica y a transformaciones en las funciones de las células endoteliales que desencadenan alteraciones que llevan al desarrollo de enfermedades cardiovasculares y al síndrome metabólico (SM).
Como ya se mencionó, el medio ambiente tiene un impacto indiscutible en la salud durante toda la vida. Se ha sugerido que infl uye en casi el 85 % de todas las enfermedades.16 Nuestro entorno de vida moderno puede incluso desempeñar un papel dominante en la actual epidemia de obesidad y diabetes.17 El mayor acceso a alimentos de bajo costo con alto contenido energético, la poca actividad física diaria y una creciente dependencia de la tecnología son algunos aspectos que caracterizan la vida moderna, sobre todo en el medio urbano.

Los factores de riesgo clásicos que se han asociado al desarrollo de obesidad son el consumo excesivo de calorías junto con un estilo de vida sedentario. Sin embargo, la epidemia de la obesidad en todo el mundo no se explica si se consideran solamente estos factores. Para tratar de entender la etiopatogénesis de estas enfermedades, se están proponiendo nuevas hipótesis, como la infl uencia del estrés, alteraciones inmunoló- gicas, defi ciencia de micronutrientes, la microbiota intestinal y sustancias químicas que alteran el sistema endocrino, lo cual modifi ca el balance de energía(2)


Bibliografía

1.-Storino-Farina, M.A. Endocrinología y Nutrición (Epigenética y diabetes).(actualizado 12 de Diciembre del 2012) acceso el 7 de Mayo del 2017, disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/endoc/er-2012/er124d.pdf

2.-Valladares-Salgado,A. Temas de actualidad (Epigenética de la obesidad infantil y de la diabetes).(actulizado 15 de Diciembre 2013) acceso el 7 de Mayo 2017, disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/imss/im-2014/ims141o.pdf